Desarrollo y validación de un inmunoensayo para la detección de la leptina caprina

Resumo

La leptina es una hormona proteica sintetizada y secretada por los adipocitos blancos, que controla varios procesos metabólicos, balance energético, fertilidad, inflamación y angiogénesis. Este estudio muestra el desarrollo y validación de un sistema de inmunodiagnóstico (ELISA) usando la leptina de cabra recombinante generada en Escherichia coli, a partir de esta se generó su correspondiente anticuerpo policlonal en conejos. Previo al desarrollo del sistema se demostró por inmunohistoquímica la capacidad de unión de la leptina recombinante específica a su receptor en el sistema nervioso central. Adicionalmente, el antígeno y el anticuerpo generados se evaluaron en un sistema normalizado de RIA comercial. Para validar el ELISA se comparó las concentraciones plasmáticas de leptina obtenidas con el ELISA en estudio y con un RIA para rumiantes. La curva de desplazamiento de la leptina recombinante no mostró diferencia en su pendiente ni en el coeficiente de correlación con la leptina de referencia, aunque la dosis IC50 fue menor. Se demostró la capacidad de unión de la proteína recombinante a receptores específicos del hipotálamo caprino. No hubo diferencias significativas en las concentraciones plasmáticas de leptina obtenidas por el ELISA en estudio y aquellas obtenidas utilizando el RIA formulado para rumiantes. Los resultados sugieren que el ELISA desarrollado podría ser un método eficaz para determinar la concentración de leptina en suero de cabra.