Ensayo de amplificación isotérmica de ADN mediada por asas para la detección del ADN de Ehrlichia canis en muestras de sangre de perros

Resumo

La bacteria rickettsia Ehrlichia canis es el agente etiológico de la ehrlichiosis monocítica canina, una de las mãs importantes enfermedades caninas transmitidas por garrapatas. En este estudio, un ensayo de amplificación isotérmica de ADN mediada por asas (LAMP) se desarrolló para la detección del ADN de E. canis usando iniciadores LAMP enfocando el operón groESL. Se produjeron reacciones a 60°C por 60 min y los resultados se visualizaron por electroforesis en gel. Se obtuvo una exitosa amplificación al usar ADN plasmídico conteniendo un fragmento del operón groESL y ADN extraído de muestras de sangre que dieron positivo para E. canis vía PCR en tiempo real. La especificidad de amplificación fue confirmada por la enzima de restricción EcoRI de sitios internos en iniciadores LAMP y no se observó ninguna reactividad cruzada con muestras de sangre positivas para Babesia spp., otro agente patógeno común transmitido por garrapatas. El alto costo de análisis de ácido nucleico es uno de los inconvenientes para su uso a gran escala como pruebas diagnósticas rutinarias. El ensayo LAMP para E. canisdesarrollado aquí es una alternativa interesante para PCR, una vez que no requiere un termociclador programado y, consecuentemente, reduce costos para el laboratorio clínico veterinario.