Transfección de la línea celular de salmón CHSE-214 usando un liposoma no comercial

Resumo

El rápido crecimiento de la acuicultura chilena ha incentivado la exploración de estrategias innovadoras de prevención sanitaria. Las vacunas de ADN se presentan como una alternativa viable para el control de enfermedades, pero existen barreras técnicas, como la vía de administración y los sistemas de transporte y entrega que necesitan ser soslayados. Los liposomas catiónicos son utilizados ampliamente en la incorporación de genes en líneas celulares mamíferas pero su alto costo hace prohibitivo su uso en escala comercial. Con el fin de abordar la problemática económica en la obtención del liposoma y para contribuir con un procedimiento de transfección in vitro en células de salmón, los objetivos de este trabajo fueron formular un liposoma a partir de polvo liofilizado de DOTAP y desarrollar un protocolo de transfección de vectores eucarióticos en la línea celular CHSE-214. Para ello se utilizaron los vectores pcDNA 4.0 HisMax I TOPO y pIRES-EGFP y la línea celular de salmón Chinook CHSE-214 (ATCC 1681), estableciendo tanto las características del liposoma formulado como las condiciones óptimas de transfección. Los resultados indicaron que el liposoma formulado desde polvo liofilizado de DOTAP comparte todas las características de los liposomas comerciales con la ventaja de poseer bajo costo, aproximadamente 10 veces menos. Con este liposoma se logró establecer un protocolo óptimo de transfección de células de peces CHSE-214, con vectores eucarióticos, no mostrando signos de toxicidad y permitiendo la expresión del gen incorporado en ambos vectores.